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  • (10/9)安定性・凝集抑制を目指したタンパク質溶液製剤の合理的設計・添加剤選定と構造安定性の評価
(10/9)安定性・凝集抑制を目指したタンパク質溶液製剤の合理的設計・添加剤選定と構造安定性の評価
  • 価格:49,500円(税込)

商品説明

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セミナー講師
筑波大学 数理物質系 教授 博士(理学) 白木 賢太郎 先生
[専門/主な業務]
タンパク質溶液学(安定化・凝集・共凝集・液-液相分離・凝集抑制・粘性制御)
【講師紹介】
著書:『相分離生物学』(東京化学同人)2019年8月

セミナー趣旨
本セミナーでは、タンパク質を安定に保つための溶液をどのように合理的に設計するかを解説します。まず、タンパク質凝集に対する添加剤の効果、ストレスの種類による凝集機構の違い、添加剤の作用機構、さらに緩衝液の性質の違いについて詳しく説明します。
続いて、高濃度抗体製剤やウイルス製剤の実例や、高濃度溶液の粘度制御法を取り上げ、具体的な考え方を共有します。さらに、広く用いられている添加剤アルギニンの多様な応用例と、そこから見えてくる理想的な凝集抑制剤について考察します。最後に、安定性を評価するための熱力学的解析法および分光学的分析法の実践的な方法を説明します。
◆講習会のねらい◆
今回のセミナーでは、特にバイオ医薬品製剤の設計に役立つ内容に焦点を絞り、具体的な視点から解説します。たとえば、なぜ抗体製剤ではリン酸緩衝液よりもヒスチジン緩衝液が多用されるのか、なぜそこにさらにアルギニンやメチオニンが加えられるのかといった、素朴でありながら重要な問いを合理的に理解できるようになることを目指します。また、CDスペクトルを用いた構造安定性の評価など、汎用的な装置を活用する際の実践的なノウハウも紹介します。最終的には、ある製剤がどの程度最適化されているのか、あるいはさらに改良の余地があるのかを自ら判断できるようになることを目指します。

講演内容

◆タンパク質と添加剤
 加熱凝集のデモンストレーション
 シンプルな凝集モデルと凝集抑制
 アルギニンの添加剤効果
 糖質の添加剤効果
 イオンの添加剤効果
 加熱による凝集のフィッティング分析
 凝集への添加剤効果と速度定数の算出

◆凝集ストレスの比較
 加熱凝集
 酸による凝集
 アルカリによる凝集
 長期保存による凝集

◆添加剤のメカニズム
 静電遮蔽とイオン効果
 ホフマイスター系列のイオン効果
 オキシヘモグロビンの塩析・塩溶作用の例
 タンパク質pIに近いpHでのイオン効果
 タンパク質pIから離れたpHでのイオン効果
 アルギニンとリシンの違い
 アンモニウムイオンは加熱凝集をよく抑制する
 ポリアミンは凝集を抑制する
 ジオールは凝集を抑制しにくい
 尿素 / 古くから知られる非イオン性の蛋白質変性剤
 塩酸グアニジン / 尿素より強いイオン性の蛋白質変性剤
 アルコール変性とアルコール沈殿の典型例
 エタノールの濃度が増えるとタンパク質は溶けなくなる
 界面活性剤
 ポリエチレングリコール
 PEGは特に芳香族アミノ酸側鎖を溶かす
 糖類 / 蛋白質の構造を安定化し溶液から排除する
 オスモライト / 水に溶けやすいがメカニズムは多様
 典型金属イオンの塩溶と塩析の仕組み
 例:抗体の加熱による変性をどう考えるか?
 例:界面による変性と凝集をどう考えるか?

◆タンパク質の沈澱剤
 糖とコスモトロープの凝集剤としてのメカニズム
 ポリマーの一般的な性質
 クラウディング効果
 アルコールによる沈澱メカニズム
 アルコールによる血清アルブミンの沈澱
 血清アルブミンは高濃度アルコールに溶けない

◆緩衝液の効果
 pHの定義と緩衝液
 中性緩衝液の選び方
 緩衝液のpKaリスト
 緩衝液のpHの温度依存性
 IgGを安定化する緩衝液の種類と濃度
 リン酸による蛋白質の熱変性耐性
 リン酸とTrisによるデアミデーションの比較
 強電解質の種類による緩衝液のpHシフト
 抗体分子間の相互作用 / pHとイオン強度
 抗体分子間の相互作用 / 相互作用係数
 抗体分子間の相互作用 / ホフマイスター効果
 抗体分子間の相互作用 / 緩衝液の効果

◆高濃度抗体製剤の設計
 高濃度抗体製剤43製品の特徴
 二糖類の選択・意外に糖を抜く例が多い
 緩衝剤・なぜヒスチジンが多いか?
 界面活性剤・ポリソルベート一択
 アミノ酸・なぜ複数種類入れるのか?
 メチオニンの犠牲的抗酸化作用

◆アデノウイルス製剤の設計
 アデノウイルスの構造
 メルクによるアデノウイルス製剤A195
 NaClとスクロースで改善される(基礎成分)
 エタノールとEDTAは入れた方がよい
 ポリソルベート80は多い方がよい
 アミノ酸添加の比較
 スクロースの安定化効果
 PEGの安定化効果
 アデノウイルスの製剤設計例

◆粘度の制御
 典型的な粘度の例
 粘度の温度依存性 / アンドレード式
 蛋白質溶液の粘度の増加の原因
 蛋白質の濃度と粘度の関係
 添加剤の効果:抗体溶液の粘度のpH依存性
 添加剤の効果:アルブミン溶液の粘度のpH依存性
 アルギニンが粘度を下げる蛋白質の特徴
 ヒダントインは抗体の溶液の粘度を下げる
 ヒダントインはアルブミン溶液の粘度は下げない
 プロリン誘導体によるmAbの粘度の低下
 ポリグルタミン酸による抗体溶液の粘度の低下
 低分子を使う蛋白質溶液の粘度制御

◆添加剤アルギニンの応用
 アルギニンは蛋白質を変性させにくいので使いやすい
 有効な濃度範囲とメカニズム
 アルギニンとリシンの比較
 添加剤アルギニンの原郷 / リフォールディング
 段階的希釈リフォールディングでのアルギニン添加
 アルギニン誘導体も収率を上げる
 アミノ酸は分子間相互作用をふせぐ?
 アルギニンは芳香環と相互作用する
 移相自由エネルギー計算
 高濃度抗体の粘度低下
 ポリスチレンへのタンパク質の吸着抑制
 タンパク質の結晶化効率の改善
 抗体溶液のオパレッセンスの抑制
 熱によるアミノ酸の劣化の抑制
 変性初期の静電相互作用を抑制?

◆凝集抑制剤の化学構造
 アルギニンを改良する
 アルギニンエチルエステル
 グリシンエチルエステル
 ハイドロトロープ
 凝集抑制剤の構造と考え方
 アラントイン
 ヒダントインと芳香族アミノ酸の相互作用
 被弾とインのIgG凝集の抑制
 抗体溶液のオパレッセンスの抑制
 対イオンの効果

◆立体構造の熱力学的分析
 アンフィンセンのドグマ
 水中と真空中でのフォールディング
 タンパク質立体構造の二状態転移
 ギブス自由エネルギー
 エンタルピー
 低圧モル比熱
 熱力学パラメータによる耐熱性の推測

◆タンパク質の計測
 遠紫外CDスペクトルはタンパク質二次構造を反映する
 遠紫外CDスペクトルと近紫外CDスペクトル
 遠紫外CDスペクトルに使える緩衝液や添加剤
 二状態転移の例:β構造から変性構造へ
 遠紫外CDスペクトルと等吸収点
 近紫外CDスペクトルと近紫外CDを使った熱変性曲線
 凝集・二次構造・三次構造の比較
 アルブミンのトリプトファン蛍光スペクトル
 天然構造と加熱変性構造の分光学的な比較
 トリプトファン蛍光スペクトルと添加剤効果
 濁度によるタンパク質凝集抑制剤の効果の比較法
 上清濃度によるタンパク質凝集抑制剤の効果の比較法
 タンパク質の紫外吸収スペクトル

◆アミノ酸の性質
 蛋白質構造の形成原理の基本
 アミノ酸の化学構造
 アミノ酸の溶解度
 アミノ酸の疎水性
 アミノ酸のハイドロパシー
 溶解度と疎水性の違い
 現存するアミノ酸の特徴
 必須アミノ酸と合成コスト


□質疑応答□

価格:49,500円(税込)

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